Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
- кварцевая колонка длиной от 20 м до 30 м и внутренним диаметром от 0,25 мм до 0,32 мм, покрытая поли[метил(95)фенил(5)]силоксаном Р или поли[метил(94)фенил(5)винил(1)]силоксаном Р с толщиной слоя 0,5 мкм,
- газ-носитель - водород для хроматографии Р (линейная скорость от 30 см/с до 50 см/с) или гелий для хроматографии Р (линейная скорость от 20 см/с до 35 см/с). Линейную скорость измеряют следующим способом: в
условиях определения стеринов вводят от 1 мкл до 3 мкл метана или пропана. Измеряют время в секундах, необходимое для прохождения газа через колонку от момента введения до появления пика (tm). Линейную скорость вычисляют по формуле L/tm, где L - длина колонки в сантиметрах;
- деление потока - 1:50 или 1:100;
- температура колонки - 260°С;
- температура инжектора - 280°С;
- температура детектора - 290°С.
Хроматографируют в указанных условиях по 1 мкл каждого раствора.
На хроматограмме раствора сравнения (а) обнаруживается четыре основных пика, соответствующих холестерину, брассикастерину, кампестерину и в-ситостерину; на хроматограмме раствора сравнения (b) обнаруживается четыре основных пика, соответствующих кампестерину, стигмастерину, в-ситостерину и Д7-сигмастенолу. Времена удерживания стеринов относительно в-ситостерина даны в Табл. 2.4.23.-1.
Пик внутреннего стандарта (бетулин) должен быть четко отделен от пиков определяемых стеринов.
Идентифицируют пики, обнаруженные на хроматограмме испытуемого раствора, и вычисляют процентное содержание каждого стерина в стериновой фракции испытуемого вещества по формуле:
С = - • 100
S
где:
С — процентное содержание стеарина;
А — площадь пика, соответствующего определяемому стерину;
S — сумма площадей всех пиков, соответствующих компонентам, указанным в Табл. 2.4.23.-1.
Если это указано в частной статье, вычисляют количество каждого стерина в миллиграммах, содержащееся в 100 г испытуемого вещества, по формуле:
_ A • mS • 100
С =----S----
As • m
где:
С —количество стеарина в миллиграммах;
А — площадь пика, соответствующего определяемому компоненту;
As — площадь пика, соответствующего бетулину; m — масса навески образца испытуемого вещества, в граммах; ms — масса прибавленного бетулина Р, в миллиграммах.
Таблица 2.4.23.-1
Времена удерживания стеринов по отношению к времени удерживания в-ситостерина для двух различных колонок__________________________
Поли[метил(9 5 ) - Поли[метил(94)-фенил(5)
фенил (5)]силоксан вннил(1)]-силоксан
Холестерин 0.63 0.67
Брассикастерин 0.71 0.73
24-Метиленхолестерин 0.80 0.82
Кампестерин 0.81 0.83
Кампестанол 0.82 0.85
Стигмастерин 0.87 0.88
Д-Кампестерин 0.92 0.93
Д5,23-Стигмастадиенол 0.95 0.95
Клеростерин 0.96 0.96
в-Ситостерин 1 1
Ситостанол 1.02 1.02
Д5-Авенастерин 1.03 1.03
Д5,24-Стигмастадиенол 1.08 1.08
Д7-Стигмастенол (1) 1.12 1.12
Д7-Авенастерин 1.16 1.16
Бетулин 1.4 1.6
(1) Д7-Стигмастенол в литературе может упоминаться как Д7-Стигмастерин
2.4.24. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ОСТАТОЧНЫХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ И ИХ КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Методики испытаний, приведенные в этой общей статье, могут быть использованы:
1) для идентификации основной массы остаточных растворителей классов 1
и 2 в субстанциях, вспомогательных веществах и готовых лекарственных средствах, если остаточные растворители неизвестны;
2) для определения предельного содержания растворителей классов 1 и 2,
если они присутствуют в субстанциях, вспомогательных веществах и готовых лекарственных средствах;
3) для количественного определения растворителей класса 2, если их предельное содержание превышает 1000 ppm (0,1%), или, если необходимо, для количественного определения растворителей класса 3.
Остаточные растворители классов 1, 2 и 3 перечислены в статье 5.4. «Остаточные количества органических растворителей».
Для приготовления испытуемых растворов ниже приведены три растворителя, а также условия введения газовых проб при парофазной газовой хроматографии. Хотя описаны две хроматографические системы, предпочтительнее использовать систему А, система В обычно используется для идентификации. Выбор методики приготовления испытуемых растворов зависит от растворимости анализируемого вещества и, в первую очередь, от класса контролируемого остаточного растворителя.
